کلونینگ و بیان ژن nef ویروس hiv-1

nef یکی از پروتئین های همراه در hiv است که برای همانند سازی ویروس در سلول های میزبان در طول عفونت ویروسی ضروری است. با توجه به جای گیری nef در غشای اندوزمی و پلاسمایی و اثر تحریک کننده ی آن بر خروج خود از طریق آزادسازی اگزوزم ها، و نیز اثر کاهنده ی آن بر سلول های cd4+، هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ژن nef ویروس hiv به منظور تهیه ی پروتئین nef نوترکیب بود. به این منظور سلول های بیان کننده ی پروتئین فیوژن nef-eyfp تولید شدند. ابتدا ترانسفکشن کلون pnef-eyfpf2 و کلون های pmscvnef-eyfp به سلول های 293t صورت گرفت. کلون eyfp-hygro نیز به عنوان کنترل eyfp مثبت به سلول های 293t ترنسفکت شد. بیان پروتئین نوترکیب nef با استفاده از میکروسکوپی هم- کانون و آنالیز وسترن بلات بررسی شد. پروتئین فیوژن nef-eyfp-hygro در تمامی کلون های مورد بررسی قابل تشخیص بود. بنابراین بیان این پروتئین در کلون های مذکور با موفقیت انجام شده است. در نهایت پلازمید های استخراج شده از کلون های pnef-eyfp-hygro به همراه پلازمید های pmlv gag/pol و pvsv-g به سلول های 293t ترنسفکت شدند تا ذرات رترویروسی نوترکیب تولید شوند. این ذرات ویروسی نوترکیب می توانند در سایر مطالعات مرتبط با اثر nef بر رفتار های مختلف سلولی مورد استفاده قرار گیرند.